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熒光定量PCR的使用方法和用途

更新時間:2023-02-08      點擊次數:1654
  熒光定量PCR反應就是從RNA反轉錄至cDNA,然后通過PCR反應擴增cDNA的過程。Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒采用了一步反應法完成整個RT-PCR反應,即RNA-cDNA-PCR反應操作在同一反應體系中進行,反應過程中不需增加額外的步驟,就可完成整個RT-PCR反應,同時整個反應系統且含有電泳時所需要的試劑,可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡捷、靈敏度高、重復性好的特點,可適用于各種動、植物、病毒RNA的PCR檢測。
 
  熒光定量PCR使用注意事項:
 
  1.平臺效應:PCR不能進入平臺期,出現平臺效應與所擴增的目的基因的長度、序列、二級結構以及目標DNA起始的數量有關。故對于每一個目標序列出現平臺效應的循環數,均應通過單獨實驗來確定。
 
  2.防止DNA的污染:①采用DNA酶處理RNA樣品;②在可能的情況下,將PCR引物置于基因的不同外顯子,以消除基因和mRNA的共線性。
 
  3.RNA提取試劑盒:目前試劑公司有多種RNA提取試劑盒、cDNA試劑盒、PCR試劑盒以及RT-PCR試劑盒出售,其原理基本相同,但操作步驟不一。如果使用試劑盒,具體操作步驟請參照試劑盒說明書。
 
  熒光定量PCR的使用方法和用途:
 
  1.支原體常規PCR檢測試劑盒(一步法)
 
  1)適合科研單位檢測,或單位內檢,用PCR法檢測細胞或其他生物基質。
 
  2) 比藥典操作標準合并了一步,(將內控對照試劑預先混合在PCR mix試劑中),操作更簡潔。
 
  3)樣本量為2μl,靈敏度為20個基因組拷貝/反應。結果準確。
 
  2.支原體常規PCR檢測試劑盒(經典法,不含Taq酶)
 
  1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求,更適合細胞治療,CAR-T,抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質檢。
 
  2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。
 
  3)試劑盒中不含Taq酶,需另外購買。
 
  4) 廠家可協助完善方法驗證步驟。
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